دوشنبه 18 دسامبر 2017

تعیین توالی

 

 

 

 

 

 

 

انجام عمل Sequencing مستلزم استفاده از نمونه خون، DNA و PCR Product و يا ( Plasmids (Cosmids,BACs می باشد كه جهت دريافت نتيجه هرچه بهتر تعيين توالی، رعايت نكات ذيل الزامي مي باشد.

 

1- لطفا، فرم سفارش تعیین توالی را دانلود نموده، اطلاعات خودرا وارد نموده و برای ما به آدرس ایمیل زیر ارسال نمایید.

ایمیل: این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید

 

 

2- در هنگام ارسال نمونه ها جهت تعيين توالی، از ويالهای 1.5ml استفاده كرده و از بسته شدن كامل درب آنها مطمئن شويد و آنها را با مقدار كافي از پارا فيلم كاملاً ببنديد كه احتمال تبخير و يا ريختن نمونه وجود نداشته باشد. سپس توسط ماژيك ضدآب مشخصات نمونه را بطور خوانا روی هريك از نمونه ها بنويسيد.

 

3- قابل توجه است كه برای حصول نتيجه بهتر در تعيين توالی، محصول PCR بايد كاملاً خالص باشد و هنگامي كه نمونه بروی ژل آگارز برده می شود بعد از الكتروفورز، نبايد باند غير اختصاصی و يا اسمير مشاهده شود و فقط يك  باند خوب و واضح ملاحظه گردد.

 

4- در صورت نياز، شرکت حاضر به انجام خالص سازی(Purification اولیه جهت ازبین بردن هرگونه ناخالصی محصولPCR )نمونه های شما می باشد که در اين حالت  بايد در فرم سفارش این مطلب ذکر گردد.

 

حجم و غلظت لازم جهت ارسال نمونه و پرايمر

1- در صورتي كه نمونه شما خالص سازي شده است و نيازي به Purification نداشته باشد، ما نياز به حجم حدود 40µl و غلظت(80µl/ng) از هر نمونه ارسالی شما داريم(غلظت نمونه ارسالی شما بستگی به طول قطعه دارد).

 

2- در صورتيكه نمونه شما نياز به خالص سازی  داشته باشد (Purification Needed )، نياز به حجم حدود 50µl از نمونه ارسالی شما داريم (غلظت نمونه ارسالي بستگی به طول قطعه دارد).

 

3- در صورتي كه نمونه ارسالی از Plasmid (فاژ،Bac و...) باشد، ارسال غلظتی حدود (150µl/ng) و حجمی برابر 30µl تا 40µl نيازاست (بستگي به اندازه قطعه دارد).

 

4- پرايمر ارسالی شما بايد از غلظت 3.2pMol و حجم 10µl از پرايمر لازم است. شايان ذكر است كه هنگام فرستادن نمونه های Sequencing در مورد ارسال درست پرايمر ها دقت كامل را مبذول فرمائيد.( توجه داشته باشيد كه پرايمر رقيق شده زودتر از بين می رود و تبخير مي شوند).

 

5- انتخاب صحيح پرايمر مربوط به نمونه های ارسالی ، به عهده شما بوده و بايد پرايمر بهمراه نمونه ها ارسال گردد.(شايان ذكر است كه برخی از پرايمرهای يونيورسال در آزمايشگاه موجود مي باشد و نيازی به ارسال اين پرايمرهاتوسط مشتری نيست.)

 

6- شركت دانش بنیان زیماژن در صورت نياز ،توانايي سنتز پرايمرهاي مورد نظر مشتريان را نيز دارا ميباشد، برای سفارش این خدمت از طریق منو خدمات، طراحی پرایمر سفارش خود را ثبت نموده و شرکت را در جریان امر بگذارید(كه در اين صورت زمان تهيه پرايمر به زمان تعيين توالی افزوده مي گردد).

 

7- چنانچه طول قطعه شما بيش از 700 و يا 800 باز است (مثلاً 3kb) و قصد داريد همه آنرا تعيين توالی كنيد ما قادر به انجام Primer Walking هستيم (توجه داشته باشيد،حجم و غلظت های ذكر شده در موارد فوق صرفاً جهت بهترين شرايط Sequencing تأكيد مي گردد و مازاد نمونه ها و پرايمرهای ارسالی در صورت نياز به مشتريان مرجوع مي گردد).